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怎樣使用Trypan blue進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)?

更新時(shí)間:2023-10-31      點(diǎn)擊次數(shù):692

生物學(xué)家可以利用多種儀器和消耗品檢測來探索總體細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞活力。血細(xì)胞計(jì)數(shù)法是手動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)的傳統(tǒng)工具,Trypan blue是醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室中使用普遍的細(xì)胞排除染料之一。然而,排除染料臺(tái)盼藍(lán)仍然是細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)用的關(guān)鍵組成部分,而過時(shí)的血細(xì)胞計(jì)數(shù)器已逐漸被 DeNovix CellDrop™ 等創(chuàng)新型自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器所取代。

 即使是基于載玻片的自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)也無法與 CellDrop DirectPipette™技術(shù)建立的標(biāo)準(zhǔn)競爭 ,該技術(shù)可以提高臺(tái)盼藍(lán)等排除染料的功效。

Trypan blue是主要的細(xì)胞排除染料之一,用于區(qū)分溶液中的活細(xì)胞和死細(xì)胞,以計(jì)算總體活力。它通過滲透受損細(xì)胞膜并與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合來對死細(xì)胞進(jìn)行染色,從而產(chǎn)生深藍(lán)色外觀。這篇文章將更深入地探討臺(tái)盼藍(lán)細(xì)胞計(jì)數(shù)的一般原理和局限性。

概述Trypan blue細(xì)胞計(jì)數(shù)

Trypan blue是一種偶氮染料,用作多種排除染色劑之一,用于測量懸浮液中活細(xì)胞的數(shù)量,利用活細(xì)胞膜抵抗某些化學(xué)染色劑滲透的原理。用臺(tái)盼藍(lán)檢測的細(xì)胞懸浮液將理想地顯示具有透明細(xì)胞質(zhì)(活細(xì)胞)和藍(lán)色細(xì)胞質(zhì)(死細(xì)胞)的細(xì)胞。這有利于使用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行簡單的細(xì)胞計(jì)數(shù)。

典型臺(tái)盼藍(lán)細(xì)胞計(jì)數(shù)測試的一般程序如下:

  • 將微量 (μl) 細(xì)胞懸浮液和 0.4% 臺(tái)盼藍(lán)染料在蛋白質(zhì)緩沖系統(tǒng) (PBS) 中混合,以達(dá)到所需的比例并使測定的樣品均質(zhì)化。

  • 在室溫下孵育適當(dāng)?shù)臅r(shí)間,以確保準(zhǔn)確測量細(xì)胞活力。

  • 可選:在細(xì)胞計(jì)數(shù)之前進(jìn)行顆粒化和重懸,并根據(jù)需要過濾以去除溶液中的聚集物。

  • 將微量樣品移入血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)區(qū)域、細(xì)胞計(jì)數(shù)一次性玻片上,或直接移至 CellDrop 的光學(xué)計(jì)數(shù)室中。

  • 使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的網(wǎng)格線手動(dòng)計(jì)數(shù)染色和未染色的細(xì)胞,或在自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)系統(tǒng)上運(yùn)行適當(dāng)?shù)能浖宰詣?dòng)獲取準(zhǔn)確的活力測量值。

臺(tái)盼藍(lán)細(xì)胞計(jì)數(shù)的局限性

盡管Trypan blue被廣泛用于細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力測試,但它也存在局限性,這使得傳統(tǒng)測量變得復(fù)雜。例如,與血清蛋白相比,Trypan blue對細(xì)胞蛋白的親和力降低,可能會(huì)為細(xì)胞形態(tài)的可視化創(chuàng)造具有挑戰(zhàn)性的條件。這可能需要對樣品進(jìn)行分析,然后將其重新懸浮在額外的無蛋白質(zhì)緩沖液中,然后才能進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。


CellDrop 旨在通過操作員觸手可及的一套特定應(yīng)用軟件來克服此類問題。Trypan Blue 為例;Trypan Blue 應(yīng)用程序可用于快速活/死細(xì)胞計(jì)數(shù),計(jì)算數(shù)量除以體積(細(xì)胞/mL)和活力百分比。只需遵循標(biāo)準(zhǔn)檢測準(zhǔn)備程序,將 10 µl 溶液移入光學(xué)藍(lán)寶石細(xì)胞計(jì)數(shù)室,然后點(diǎn)擊計(jì)數(shù)按鈕。這實(shí)際上消除了人為錯(cuò)誤,確保針對Trypan Blue 活力測試的挑戰(zhàn)優(yōu)化工藝參數(shù),并提供易于導(dǎo)出的結(jié)果格式。

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