研究人員可以使用 Navinci 的基于鄰近連接的創(chuàng)新空間蛋白質(zhì)組學(xué)解決方案組合來可視化和量化蛋白質(zhì)、它們的相互作用以及細(xì)胞和組織中的修飾。

蛋白質(zhì)形成巨大、復(fù)雜的相互作用網(wǎng)絡(luò)來介導(dǎo)細(xì)胞功能。它們的表達(dá)和結(jié)合是動(dòng)態(tài)的，細(xì)胞響應(yīng)內(nèi)部和外部刺激而上調(diào)或下調(diào)蛋白質(zhì)水平以及蛋白質(zhì)復(fù)合物的組裝和分解。蛋白質(zhì)功能可以通過翻譯后修飾 (PTM)、組織分布模式和亞細(xì)胞定位進(jìn)一步完善。

蛋白質(zhì)并不是孤立發(fā)揮作用的。大多數(shù)蛋白質(zhì)功能是由蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用 (PPI) 和 PTM 介導(dǎo)的。蛋白質(zhì)相互作用組的一個(gè)節(jié)點(diǎn)的破壞可能會(huì)破壞整個(gè)網(wǎng)絡(luò)的平衡。因此，闡明 PPI 是了解健康和疾病中的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑以及識(shí)別新藥物靶點(diǎn)的關(guān)鍵。  

為了充分了解蛋白質(zhì)功能的復(fù)雜性，有必要在其天然環(huán)境中觀察 PPI，然而，該領(lǐng)域的檢測(cè)工具歷來受到限制。使用免疫共沉淀、蛋白質(zhì)印跡或 FRET/BRET 測(cè)定等技術(shù)無法獲得蛋白質(zhì)動(dòng)態(tài)的空間視圖，這些技術(shù)會(huì)破壞細(xì)胞和組織結(jié)構(gòu)或天然蛋白質(zhì)狀態(tài)。此外，使用傳統(tǒng)的免疫熒光 (IF) 和免疫組織化學(xué) (IHC) 方法無法可靠地進(jìn)行 PPI 研究，這些方法只能確定兩個(gè)熒光標(biāo)簽是否出現(xiàn)共定位，這可能是分辨率限制的結(jié)果，而不是真正的結(jié)果。相互作用。

Naveni ®基于鄰近連接的檢測(cè)是下一代技術(shù)，可 通過檢測(cè)和可視化改進(jìn)蛋白質(zhì)及其修飾的原位研究：

• 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用
  

• 同時(shí)游離和相互作用的蛋白質(zhì)
  

• 翻譯后修飾（例如磷酸化）

• 蛋白質(zhì)定位和分布

建立在遺產(chǎn)之上

開發(fā)原始鄰近連接分析 (PLA) 的先驅(qū)者也構(gòu)建了 Navinci 的平臺(tái)。Navinci 的產(chǎn)品基于 Naveni ®鄰近連接技術(shù)，這是一種基于鄰近連接的方法，利用寡核苷酸設(shè)計(jì)和抗體-寡核苷酸綴合物的現(xiàn)代進(jìn)步，在特異性、靈敏度、易用性和穩(wěn)定性方面比現(xiàn)有空間蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)具有顯著優(yōu)勢(shì)。數(shù)據(jù)解釋。

優(yōu)異的特異性

Naveni ®鄰近連接技術(shù)使用一對(duì)精心挑選的 Navenibodies（與專有寡核苷酸臂綴合的抗體）來直接（即通過初級(jí)綴合物系統(tǒng)）或間接（即通過次級(jí)綴合物系統(tǒng)）檢測(cè)感興趣的靶標(biāo)。僅當(dāng)檢測(cè)到的蛋白質(zhì)距離為 40 nm 或更小時(shí)，Navanibody 對(duì)之間才會(huì)發(fā)生鄰近連接，從而確保 PPI 檢測(cè)。通過 Navenibody 對(duì)對(duì)靶標(biāo)進(jìn)行雙重識(shí)別，通過減少抗體交叉反應(yīng)性引起的非特異性結(jié)合來增強(qiáng)特異性。

高靈敏度

專有的 UnFold 檢測(cè)系統(tǒng)可放大信號(hào)，與現(xiàn)有選項(xiàng)相比，可以實(shí)現(xiàn)高靈敏度和更高的信噪比。當(dāng)發(fā)生鄰近連接時(shí)，Navenibodies 上的寡核苷酸探針被激活并雜交以形成 DNA 環(huán)。添加聚合酶后，就會(huì)啟動(dòng)滾環(huán)擴(kuò)增 (RCA) 反應(yīng)，從而擴(kuò)增環(huán)序列。這增強(qiáng)了信號(hào)強(qiáng)度，因?yàn)槊總€(gè)重復(fù)序列都可以通過單獨(dú)的熒光團(tuán)標(biāo)記的檢測(cè)寡核苷酸進(jìn)行檢測(cè)，從而導(dǎo)致數(shù)百個(gè)熒光標(biāo)簽標(biāo)記單個(gè) PPI。

清晰的目標(biāo)檢測(cè)和定量

這些信號(hào)可以作為不同的熒光或顯色點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，可以通過熒光或明場(chǎng)顯微鏡（取決于所選的試劑盒格式）進(jìn)行可視化。使用數(shù)字圖像分析或視覺解釋可以輕松量化結(jié)果。

無需人工表達(dá)

由于 Naveni ®鄰近連接技術(shù)，研究人員有望實(shí)現(xiàn)比傳統(tǒng) PLA 高達(dá) 10 倍的靈敏度提高，從而可以檢測(cè)內(nèi)源水平的低豐度蛋白質(zhì)或難以檢測(cè)的靶標(biāo)，而無需實(shí)驗(yàn)過度表達(dá)，并且只需極少的投入使用珍貴（且昂貴）的抗體。

與現(xiàn)有的組織學(xué)工作流程和設(shè)備兼容

所有 Navinci 產(chǎn)品均與現(xiàn)有的組織學(xué)工作流程和標(biāo)準(zhǔn)組織學(xué)設(shè)備兼容。可選擇明場(chǎng)顯微鏡和熒光顯微鏡，無需額外儀器。協(xié)議與核染料或組織學(xué)染色劑（如蘇木精和伊紅等）共染色兼容，可在保留的細(xì)胞或組織結(jié)構(gòu)內(nèi)提供目標(biāo) PPI 的可視化。